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菌種的是要主要有哪些注意事項(xiàng)

更新日期: 2019-09-11
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   菌種在使用和傳代過(guò)程中容易發(fā)生污染、變異甚至死亡,因而常常造成菌種的衰退,并有可能使優(yōu)良菌種丟失。菌種保藏的重要意義就在于盡可能保持其原有性狀和活力的穩(wěn)定,確保菌種不死亡、不變異、不被污染,以達(dá)到便于研究、交換和使用等諸方面的需要。
 
  菌種保藏是將微生物菌種采用適宜的方法妥善保藏,避免其死亡、污染,并保持其原有性狀基本穩(wěn)定的一種實(shí)驗(yàn)方法,也是微生物實(shí)驗(yàn)室極為重要的一項(xiàng)基礎(chǔ)性工作。
 
  甘油冷凍保藏菌種是目前實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用為廣泛的一種的菌種保藏方法,原理是以甘油為保護(hù)劑,低溫冷凍條件下,使微生物的新陳代謝趨于停止,從而達(dá)到長(zhǎng)期有效的保藏。一般來(lái)說(shuō),保藏溫度越低,保藏效果越好,目前實(shí)驗(yàn)室大都采用-80℃(-70℃)冰箱保藏。主要有以下注意事項(xiàng):
 
  1.選擇合適的培養(yǎng)基
 
  勿使用選擇性培養(yǎng)基。一般使用非選擇性的增菌培養(yǎng)基,因?yàn)槲⑸镌谶x擇性培養(yǎng)基中生長(zhǎng)某些生物特性可能丟失,保藏的菌種的生物特性可能與標(biāo)準(zhǔn)菌株特性不同。
 
  2.菌液的濃度
 
  菌液的濃度一般越大,菌種保存時(shí)間越長(zhǎng)。保藏時(shí)細(xì)菌常使用菌液,霉菌常用無(wú)菌水或生理鹽水制備成的孢子懸液。
 
  3.甘油濃度
 
  甘油終濃度一般為10%~20%。由于甘油原液太粘稠,需要配制合適的甘油-水溶液,將菌懸液與甘油以1:1的體積比充分混勻后,分裝至提前滅菌好的保藏管中,-80℃(-70℃)冰箱保存。
 
  4.反復(fù)使用
 
  對(duì)菌種進(jìn)行保藏時(shí)注意“慢凍快化”,冷凍時(shí)降溫速率保持1℃/min,復(fù)蘇時(shí)用37℃水浴融化,能夠保證菌種大的成活率。當(dāng)冷凍菌種融化后,應(yīng)避免再次冷凍,否則菌體的生存率會(huì)大幅度降低。
 
  5.保存時(shí)間
 
  該方法適合中長(zhǎng)期菌種保藏,保藏時(shí)間一般為2-4年左右。
 
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