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細(xì)胞培養(yǎng)基的操作步驟 你了解嗎

更新日期: 2020-12-16
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  細(xì)胞培養(yǎng)基是人工模擬細(xì)胞在體內(nèi)生長的營養(yǎng)環(huán)境,是提供細(xì)胞營養(yǎng)和促進細(xì)胞生長增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)。培養(yǎng)液或培養(yǎng)基的含義幾乎相同,英文都是medium。當(dāng)它是粉劑時,傾向性地稱為培養(yǎng)基,而將粉劑配成液體后,多稱為培養(yǎng)液。培養(yǎng)液中常常補加血清、抗生素等成分。
 
  步驟:
 
  一、復(fù)蘇
 
  1.把凍存管從液氮中取出來,立即投入37℃水浴鍋中,輕微搖動。液體都融化后(大概1-1.5分鐘),拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。
 
  2.把上述細(xì)胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中(用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍,把粘在壁上的細(xì)胞都洗下來),1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
 
  3.把上清液倒掉,加1ml培養(yǎng)基把細(xì)胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動,使培養(yǎng)皿中的細(xì)胞均勻分布。
 
  4.標(biāo)好細(xì)胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等,放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),細(xì)胞貼壁后換培養(yǎng)基。
 
  5.3天換一次培養(yǎng)基。
 
  二、傳代
 
  1.培養(yǎng)皿中的細(xì)胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。
 
  2.把原有培養(yǎng)基吸掉。
 
  3.加適當(dāng)?shù)囊鹊鞍酌?能覆蓋細(xì)胞就行),消化1-2分鐘。
 
  4.細(xì)胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。
 
  5.用移液槍吹打細(xì)胞,把細(xì)胞都懸浮起來。
 
  6.把細(xì)胞吸到15ml的離心管中,1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
 
  7.倒掉上清液,加1-2ml培養(yǎng)基,把細(xì)胞都吹起來。
 
  8.根據(jù)細(xì)胞種類把細(xì)胞傳到幾個培養(yǎng)皿中。一般,癌細(xì)胞分5個,正常細(xì)胞傳3個,繼續(xù)培養(yǎng)。
 
  三、凍存
 
  把細(xì)胞消化下來并離心(同上)。用配好的凍存液把細(xì)胞懸浮起來,分裝到滅菌的凍存管中,靜止幾分鐘,寫明細(xì)胞種類,凍存日期4℃30min,-20℃30min,-80℃過夜,然后放到液氮灌中保存。
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