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原代細胞的培養(yǎng)質(zhì)量至關(guān)重要

更新日期: 2020-12-25
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  原代細胞的培養(yǎng)是指直接從機體取下細胞、組織和器官后立即進行培養(yǎng)。因此,較為嚴(yán)格地說是指成功傳代之前的培養(yǎng),此時的細胞保持原有細胞的基本性質(zhì),如果是正常細胞,仍然保留二倍體數(shù)。但實際上,通常把一代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng),是細胞培養(yǎng)中很重要的,其質(zhì)量決定著傳代細胞的質(zhì)量,因此它的培養(yǎng)的質(zhì)量至關(guān)重要。
 
  原代細胞是非常敏感的細胞,需要傳統(tǒng)培養(yǎng)基之外的額外營養(yǎng)物質(zhì)。為了優(yōu)化存活和生長,需要針對每種細胞類型選擇特定的培養(yǎng)基。例如,內(nèi)皮細胞對營養(yǎng)的需求與上皮細胞或神經(jīng)元有很大區(qū)別,因此需要特制的內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基。而傳統(tǒng)的細胞培養(yǎng)基依靠血清提供生長因子、激素、脂質(zhì)和其他的未知組分,以支持細胞的生長。但對于原代細胞,高血清水平可導(dǎo)致細胞分化,或促進污染細胞如成纖維細胞的生長。
 
  此外,添加血清也受到成本上升及不同批次間差異性的困擾。配制具有很少或沒有血清的特殊培養(yǎng)基則可以避免這些問題,并且更加有利于促進特定類型細胞的生長。此外,其他一些實踐,例如在更多的生理學(xué)相關(guān)底物上接種原代細胞而不是使用合成聚合物,可以顯著的促進細胞貼壁、增殖及保持純度。
 
  實驗步驟:
 
  1.試劑耗材準(zhǔn)備;
 
  2.取新鮮動物組織;
 
  3.酶消化;
 
  4.過濾網(wǎng)篩選、分離細胞;
 
  5.加培養(yǎng)液,37℃、5%CO2培養(yǎng);
 
  6.傳代;
 
  7.凍存;
 
  8.復(fù)蘇。
 
  應(yīng)用:
 
  1.為研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段;
 
  2.為傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件;
 
  3.服務(wù)于臨床實踐,用于藥物篩選等。
 
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